在脂质代谢与心血管相关细胞实验场景中,想要直观追踪脂蛋白颗粒进入细胞的全过程,荧光标记低密度脂蛋白是一类常用的实验材料。低密度脂蛋白本身源自极低密度脂蛋白的转化,生理状态下承担胆固醇向全身细胞输送,同时将部分胆固醇转运至肝脏合成胆酸的功能,而经过荧光修饰之后,颗粒可以借助荧光信号,在显微镜、流式检测设备下被捕捉,方便科研人员观察受体介导的内吞完整过程,很多动脉粥样硬化相关课题,都会借助该材料开展LDL代谢、氧化过程的体外探究。
上海书吉生物科技所制备的
荧光标记低密度脂蛋白原料取自健康人源血浆,依靠超速离心完成分离纯化,再通过琼脂糖电泳的方式,把控脂蛋白颗粒的均匀程度,产品完成无菌处理,科研人员拿到之后,可直接使用PBS磷酸盐缓冲液或是细胞培养液按需稀释,省去复杂的前期纯化步骤,适配多数体外细胞孵育实验场景。
实际开展实验时,需要留意工作液的稳定性问题。荧光标记低密度脂蛋白经过稀释之后得到的工作液稳定性偏弱,需要做到即配即用,不建议提前大量配制后存放。产品储存阶段放置于2‑8℃环境,全程避光,不可以进行冻存操作。在存放周期内,瓶内有可能出现少量沉淀,该现象属于正常情况,遇到这类情况,可以采用低速离心两分钟的处理方式,去除沉淀之后再取用上层液体开展实验,不会对实验结果造成干扰。
做受体结合相关实验时还要关注缓冲液内EDTA含量,LDL和对应受体发生结合,需要钙离子、锰离子参与反应,体系中如果EDTA含量过高,会对两者结合过程产生抑制,进而改变细胞摄取荧光标记低密度脂蛋白的实验现象,造成数据偏离真实情况。开展全部操作过程,实验人员需要穿戴实验服和一次性手套,做好生物样本操作的基础防护。除荧光标记低密度脂蛋白之外,同系列还有氧化修饰、乙酰化修饰的人源低密度脂蛋白,能够满足不同课题对于天然、修饰型脂蛋白的多元实验需求。在共聚焦成像、内吞动力学检测等不同实验中,合理把控储存、稀释、缓冲液条件,才能够稳定获得可重复的实验现象。