柠檬酸(CA)含量测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
CA是生物体内常见的有机酸,是重要的食品风味物质。此外,CA是三羧酸循环 步反应的产物。
测定原理:
酸性条件下,柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+,在545nm处有特征吸收峰;通过测定545nm吸光值的增加,即可计算出样品中柠檬酸含量。
自备仪器和用品:
低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。
样品中柠檬酸提取:
1.液体样品中柠檬酸提取:取0.1mL液体加试剂一0.9mL,充分混匀,11000g, 4℃离心10min,取上清液,待测。
2.组织中柠檬酸提取:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。11000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
3.线粒体中柠檬酸提取:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆,600g/min,4℃离心5min;取上清至另一EP管中,11000g,4℃离心10min,弃上清(此上清液可用于细胞质CA含量测定);向沉淀中加试剂二200μl,以及试剂三2μl,充分悬浮溶解,11000g,4℃离心10min,取上清液,待测。
4.按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);11000g,4℃离心10min,取上清置冰上待测。
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