粒体柠檬酸(MCA)含量测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
MCA是线粒体三羧酸循环的 个中间产物,由柠檬酸合酶催化乙酰CoA 与草酰乙酸合成, 其含量是三羧酸循环强度的主要指标之一。配合测定丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性、乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 MCA 含量, 其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脱氢酶活性变化可以反映糖酵解进行程度,(2)综合分析丙酮酸含量、丙酮酸脱氢酶活性和乙酰 CoA 含量变化可以反映脂肪酸β-氧化途径提供的乙酰CoA 情况,(3)乙酰 CoA 含量、柠檬酸合酶活性和 MCA 含量变化可以反映三羧酸循环进行状况。
测定原理:
MCA 在柠檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性条件下,α-酮酸进一步与苯肼反应,生成相应的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在 330nm 处有吸收峰,该波长下吸光度的变化程度可反映出 MCA 的含量。自备仪器和用品:
分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液枪、微量石英比色皿/96 孔板(UV 板)、研钵、蒸馏水。线粒体中柠檬酸提取:
称0.05~0.1g样品(建议称0.1g样本),加入0.5mL酸性提取液,冰上充分研磨,600g/min 4℃离心5min;取上清至另一EP管中,11000g/min 4℃离心10min,弃上清(取300μL该上清液和300μL碱性提取液中和后可用于细胞质CA含量测定);沉淀即线粒体,向沉淀中加入0.5mL酸性提取液,充分悬浮溶解,超声波破碎(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),取此溶液300μL和300μL碱性提取液中和,混匀,置冰上待测(不可用于蛋白质含量测定)。
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