想要直观可视化观察氧化修饰脂蛋白被细胞摄取、转运的全过程,
荧光标记氧化型低密度脂蛋白是适配该需求的实验材料,它是在氧化低密度脂蛋白基础之上,偶联荧光探针得到的产物,既保留氧化脂蛋白全部生物学特征,同时携带荧光信号,支持荧光显微镜、高内涵成像、流式细胞仪等多种检测手段,被大量用于清道夫受体功能、泡沫细胞形成、动脉粥样硬化相关体外研究工作当中。
氧化低密度脂蛋白本身经过氧化修饰之后,不再被LDL受体识别,转而由细胞表面清道夫受体识别并完成内吞,会造成胞内脂质堆积。荧光标记氧化型低密度脂蛋白在保留该生物学特性的前提下,依靠脂溶性荧光染料嵌入脂蛋白脂质结构,当颗粒被细胞通过内吞摄入胞内,荧光探针会跟随脂蛋白颗粒一同进入细胞内部,科研人员依靠荧光信号就能够直观看到颗粒在细胞当中的分布,定量统计细胞摄取脂蛋白的水平,不用再依靠间接生化检测来反推内吞效率,给实验带来更多直观的观测维度。
商品化荧光标记氧化型低密度脂蛋白原料来自健康人源血浆,先完成脂蛋白分离纯化,之后开展氧化修饰,再完成荧光探针标记,整套制备流程结束后,每一批次产品都会开展生物学验证,通常会使用牛大动脉内皮细胞、小鼠巨噬细胞开展标记特异性检测,以此保障不同批次之间实验结果的一致性。成品为无菌包装,科研人员可以直接借助细胞培养液或者无菌缓冲液稀释之后加入细胞培养体系开展孵育实验。
开展实验过程中需要关注样本稳定性,荧光标记氧化型低密度脂蛋白经过稀释得到的工作液稳定性有限,建议做到现配现用,不要提前配制长时间放置。储存条件参照氧化脂蛋白相关规范,避光低温保存,禁止冻存样本。存放过程中出现少量沉淀,可低速离心去除沉淀之后取用。在设置实验的时候,需要搭配对应的对照组,例如设置未标记氧化型低密度脂蛋白对照组,以及阴性细胞对照组,帮助区分特异性荧光信号和背景信号。操作人源来源生物材料时,穿戴一次性手套、实验服做好基础防护。
在实际课题当中,荧光标记氧化型低密度脂蛋白可以用来观察巨噬细胞、内皮细胞对氧化脂蛋白的吞噬行为,也可以用来评价药物干预之后细胞摄取氧化脂蛋白水平发生的变化,对比天然荧光标记低密度脂蛋白,两者受体识别通路全不同,天然版本依靠LDL受体,荧光标记氧化型低密度脂蛋白依靠清道夫受体,科研人员需要结合自身研究靶点,选择合适标记脂蛋白开展实验。