测定方法: 微量法
测定规格: 100管/48样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
GPT(EC 2.6.1.2)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化氨基酸和酮酸转氨基反应,在氨基酸代谢中具有重要作用。此外,哺乳动物肝细胞GPT活性很高,GPT释放到血液中,血清GPT活性显著增高。测定原理
GPT催化和α-酮戊二酸发生转氨基反应,生成丙酮酸和;加入2,肼溶液,不仅终止上述反应,而且与酮酸中的羰基加成,生成丙酮酸苯腙;苯腙在碱性条件下呈红棕色,可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。
试验中所需的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。样品测定的准备
1、细胞或组织样品的制备:或培养细胞:先收集或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万或细胞加入1mL提取液),超声波破碎或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2、血清(浆)样品:直接检测。
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