测定方法: 微量法
测定规格: 100T/96S
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
HYP是机体胶原蛋白主要成分之一,胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和等,因此HYP含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。测定原理:
样品经水解产生游离的HYP,进一步被氯胺T氧化,氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应,产生红色化合物,在560nm处有特征吸收峰。通过测定样品水解液560nm吸光值,可计算HYP含量。
自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、无水乙醇、异丙醇、6mol/L盐酸和蒸馏水。羟提取:
1.组织:称取约0.2g样品于玻璃管,加入2mL的组织提取液,置于110℃烘箱,水解6至12小时,用提取液定容至2mL,12000g,25℃,离心20min,取上清待测。2.细胞:取约500万个细胞,加入1mL的细胞提取液,于高压器中15磅保持30min,自然降压后待测。
3.血清游离羟提取:取0.1mL血清,加入0.5mL无水乙醇使蛋白质沉淀,8000g4℃离心5min。将上清倒入另一个EP管,氮吹或沸水浴将乙醇挥发干。冷却后再加入0.2mL50%异丙醇,充分溶解混匀待测。
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