NADPH-还原酶(NCR)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。测定原理:
NCR催化NADPH还原氧化型,还原型在550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。自备仪器和用品:
普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。粗酶液提取:
1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。
2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。
3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。
4、终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。
NADPH-还原酶测定操作:
1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二在37℃水浴中预热30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL蒸馏水、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化, 0s和 30s吸光值。△A空白管=A2-A1。
4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,依次加入10μL提取液、180μL试剂二、10μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化, 0s和 30s吸光值。△A测定管=A4-A3。
注意:空白管只需做一次。
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