顺乌头酸酶(ACO)测试盒
测定方法: 微量法
测定规格: 100管/96样
保存条件: 低温避光保存
有 效 期: 6个月
注 意: 正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:
顺乌头酸酶(aconitase),三羧酸循环中的酶,催化柠檬酸转变为异柠檬酸。柠檬酸本身不易氧化,在顺乌头酸酶作用下,通过脱水与加水反应,使羟基由β碳原子转移到α碳原子上,生成易于脱氢氧化的异柠檬酸,为进一步的氧化脱羧反应作准备。测定原理:
ACO 催化柠檬酸转化成异柠檬酸,异柠檬酸氧化脱羧将 NAD+ 还原生成 NADH,导致 340nm 处光吸收上升。需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。样本的前处理:
组织、或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离:1、称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1mL 试剂一和 10uL 试剂三,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
2、将匀浆转入离心管内 600g,4℃离心 5min。
3、弃沉淀,将上清液移至另一离心管中,11000g,4℃离心 10min。
4、上清液即胞浆提取物,可用于测定胞质顺乌头酸酶活性。
5、在步骤④的沉淀中加入 200uL 试剂二和 2uL 试剂三,超声波破碎(冰浴,功率 20%或200W,超声 3 秒,间隔 10 秒,重复 30 次),用于线粒体顺乌头酸酶活性测定。
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