荧光光度计主要原理依据是：激发光照射待测荧光物质发出荧光，经过放大器至记录仪，记录仪得出的信号即为样品溶液的荧光强度。本文主要介绍了RF-5301PC型荧光分光光度计 的工作原理、操作规程以及注意事项等。

仪器设备 编号、名称

仪器设备 名称：荧光分光光度计

型 号：RF-5301PC型

国 别 厂 家：日本岛津公司

工作原理

荧光产生的原理

荧光的定义：某些物质受紫外光或可见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的光。

荧光产生的原理：化学物质能从外界吸收并储存nen量(如光能、化学能等)而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的nen量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。

荧光化合物的两种特征光谱

1. 荧光激发光谱，就是通过测量荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，它反映了不同波长激发光引起荧光的相对效率

2. 荧光发射光谱，如使激发光的波长和强度保持不变，而让荧光物质所产生 的荧光通过发射单色器后照射于检测qi上，扫描发射单色器并检测各种波长下相应的荧光强度，然后通过记录仪记录荧光强度对发射波长的关系曲线，所得到的谱图称为荧光光谱。

物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。

荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭"作用，以及由于在液面附近溶液会吸收激发光，使发射光强度下降，导致发射光强度与浓度不成正比，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。

荧光发射的特点：可产生荧光的分子 或原子在接受能亮后即刻引起发光;而一旦停止供能，发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。

溶液荧光光谱通常具有的特征：

(1) 斯托克斯位移：在溶液荧光光谱中，所观察到的荧光的波长总是大于激发光的波长。

(2) 荧光发射光谱的形状与激发波长无关。

(3) 荧光发射光谱的形成与吸收光谱的形状有镜像关系