磺胺甲噁唑检测ELISA试剂盒
【样本前处理步骤】 样本处理前须知
(a)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同试剂时要更换吸头。
(b)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。
样本处理:
(a)组织样本前处理方法(不用过柱)
1、称取1±0.05g均质后的样本于离心管中,加入4ml样品提取液,振荡5min,室温4000r/min以上,离心10min;
2、取1ml上清液收集于另一试管中;加入1ml正己烷,振荡1min,室温4000r/min以上,离心10min;
3、取50µl下层液体于另一容器中,加入200μl稀释液混合30s;
4、取50μl用于分析样本稀释倍数:20倍。
(b)蜂蜜处理方法
1、准确称取1±0.05g蜂蜜样本于离心管中,加入4ml样品提取液,强烈混合振荡5min,室温4000r/min以上,离心10min;
2、取出50μl上清液于另一试管中,加入450μl稀释混合30s;
3、取50μl用于分析样本稀释倍数:40倍。
(c)牛奶样品处理方法
脱脂牛奶
1、取出50μl脱脂牛奶与1950μl稀释液,混30s;
2、取50μl用于分析脂肪奶;
3、吸取1ml牛奶样本于离心管中;于15℃环境3000r/min,离心10min;(如果没有冷冻离心机请预先冷却后再离心)
4、取出50μl牛奶于与1950μl稀释液,混合30s;
5、取50μl用于分析样本稀释倍数:40倍。
【酶标免疫分析程序】
操作步骤:
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置室温(20-25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、按板架及需要取出微孔条,将不用的微孔放入自封袋,保存于2-8℃。
3、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
4、加标准品/样本50µl/孔,然后加酶标记物50μl/孔,再加入抗体工作液50µl/孔。轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板,25℃环境反应30min。
5、取出用洗涤液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
6、显色:每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl,轻轻振荡混匀,25℃环境避光显色15min。
7、测定:每孔加入终止液50µl,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处(建议用双波长450/630nm检测在5min内读完数据),测定吸光度值(OD值)。