诺博莱德 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads - 产品名称：NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads
- 英文名称：Magrose-NHS magnetic beads
- 产品规格：1ml/5ml
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
产品简介：
说明：20%(v/v)
NobleRyderM0239 NHS磁珠 Magrose-NHS Magrose-NHS magnetic beads表面为NHS 基团修饰，能够与带有伯胺基团的蛋白和其他分子形成稳定的肽键，用于亲和纯化抗体、抗原和其他生物分子。与传统的羧基、氨基磁珠相比，表面含 NHS 基团的磁珠无需事先采用EDC/NHS或戊二醛进行活化，只需简单地将含伯氨基的生物配体溶解在试剂盒自带的Coupling Buffer 中，室温下将蛋白与NHS 磁珠混合1~2h 便可将生物配体共价偶联到磁珠上，
具有操作简单、偶联条件温和、生物配体偶联快速高效等优点。磁珠偶联过程必需在不含任何氨基的缓冲溶剂中进行。人工操作时，使用磁性分离架实现磁珠与溶剂分离。也可采用自动化设备操作，自动化操作适合用于多样品的筛选。
一、蛋白偶联操作流程及优化点
1、蛋白溶液的配制
2、磁珠的洗涤
3、蛋白偶联：（优化）
(1)Coupling Buffer 的种类。首先通过实验确定最合适的CouplingBuffer
(2)确定合适的CouplingBuffer 后，再通过实验优化蛋白溶液的浓度
4、封闭
5、磁珠保存
6、注意事项：
(1)其中磁珠洗涤要严格按照说明书采用冷却的WashingBufferA快速洗涤，以防磁珠在洗涤过程中NHS基团水解；
(2)蛋白偶联过程中， 首先要通过实验确定合适的CouplingBuffer（主要包括CouplingBufferA、Coupling Buffer B、50 mM 硼酸溶液，pH8.5、100mM 磷酸缓冲液，100mMNaCl，pH7.4 这四种）；
(3)确定合适的 CouplingBuffer 后，再以此 CouplingBuffer 为基础，确定合适的偶联蛋白浓度，因为蛋白浓度越高，偶联到磁珠上的蛋白的量会越大（这是由于NHS基团跟蛋白偶联和NHS 基团本身水解是一对竞争反应）。当然此处要综合考虑使用性能和成本，有些客户偶联少量的蛋白便可满足使用需求，这时采用低浓度的蛋白便可，这样可以降低成本。
(4)封闭这一步可以采用试剂盒中自带的3M乙醇胺，也可使用Tris 缓冲液（100mMTris-HCl,150 mMNaCl,pH 8.0），封闭时间不得低于2h，如果化学封闭后背景仍然很高，还可以额外加一步BSA封闭。
二、蛋白偶联操作步骤
以下操作过程以取磁珠样品500μL，采用1.5mLEP 管为例介绍。用户可根据自身需求按比例调整：
1、蛋白溶液配制
取适量待偶联蛋白用CouplingBuffer溶解，配成浓度为≥3.0mg/mL 的蛋白溶液。已经保存于buffer中的蛋白，需要通过透析或者脱盐的方法che底除去原有buffer里含伯胺基的物质，然后再用Coupling Buffer 配成浓度为≥3.0 mg/mL 的蛋白溶液，将配制好的蛋白溶液于4℃保存备用。
注：(1)为了达到更好的性能，蛋白浓度≥3.0mg/mL，这样偶联效率会更高，此处需综合考虑成本和使用要求；
(2)蛋白溶液中不能含有带伯氨基的成分，比如 Tris，甘an酸，明胶，BSA 等；
2、磁珠清洗
(1)取 500μL20%的磁珠悬浮液于 1.5mLEP 管中。
注：磁珠取样前要反复颠倒、使用涡旋振荡器使其混合均匀，以保证实验的同一性，每取一次样需要重新混匀。
(2)将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。
(3)加 1mL2~8℃的WashingBufferA于离心管中，涡旋 15s，使磁珠混合均匀。
(4)将EP 管置于磁性分离架内，富集磁珠，去除上清液。
3、蛋白质固定
(1)加 200μL 蛋白溶液于EP 管中，涡旋 30s，使其混合均匀。
注：磁珠洗涤后要立即加入蛋白溶液。
(2)将EP 管涡旋 15s，置于垂直混合仪上，室温混合 2~4h。如果垂直混合不均匀，则反应前 30min，每隔 5min 取下EP 管涡旋 15s。此后，每隔 15min，取下EP 管涡旋 15s。
注：如有需要可以在 4?C 反应过夜。
(3) 采用磁性分离架富集磁珠，保存流穿液。
