产品名称：His-Tag蛋白纯化磁珠（钴离子） IDA-Cobalt
产品规格：5mL/2×50mL
产品简介：
具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准
NobleRyderM0198 His-Tag蛋白纯化磁珠（钴离子） IDA-Cobalt具有超顺磁性，专为高效、快速纯化组an酸标签蛋白而设计的一种新型功能化材料。可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，极大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行组an酸标签蛋白纯化。
与传统层析方式使用的金属螯合琼脂糖预装柱相比，采用磁珠纯化组an酸标签蛋白，无需对样品进行多次长时间的高速离心和滤膜过滤、无需控制流速、更无需高昂的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤以及目标蛋白的洗脱变得简单、快速、易操作。对于熟练的操作者而言，在 1h 内就能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理，为研究者节省了时间和成本。
本产品系列包括镍离子（Nickel）、钴离子（Cobalt）两种金属离子螯合磁珠，它们在目标蛋白结合量和非特异性吸附等性能上有所区别，用户可根据目标蛋白与不同种类金属的结合性能，以及对目标蛋白的产量和纯度的要求，选择不同种类的金属离子螯合磁珠。
适用范围：
适用于纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组an酸标签蛋白，也可用于变性蛋白的纯化（包涵体需变性后再进行纯化）。
操作步骤：（仅供参考）
1、缓冲液的准备
目标蛋白与组an酸标签蛋白纯化磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，而各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合纯化目标蛋白的缓冲液体系，主要包括 BindingBuffer、WashingBuffer、Elution Buffer。
增加咪唑浓度进行洗脱是组an酸标签纯化磁珠*chang用的洗脱方法，shou次使用时，在不确定最佳的洗脱咪 唑浓度情况下，推荐在缓冲液中分别加入 10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、300 mM、400mM、500mM mi唑，浓度从低到高分别洗脱，磁吸后收集蛋白上清液，之后通过 SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
以下提供的缓冲液体系适用于多数组an酸标签蛋白的纯化，供用户参考。
Binding Buffer： 20 mMPhosphateBuffer，500mMNaCl，5~50mMImidazole，pH7.4
Washing Buffer： 20mMPhosphateBuffer，500mMNaCl，50~100mMImidazole，pH7.4
Elution Buffer： 20 mMPhosphateBuffer，500 mMNaCl，500mMImidazole，pH7.4
2、样本处理
（1）大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量的 BindingBuffer 稀释，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1mM 的 PMSF），重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，冰浴 30min，以降解核酸。另外，用户也可以根据实际需要对蛋白样品进行离心操作。
（2）胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量 BindingBuffer 稀释，即为粗蛋白样品。
（3）动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，先用适量 PBS 洗涤 1 次，弃上清；接着用适量含 1%（v/v） TritonX-100 或 1%（v/v） NP-40 的BindingBuffer 重悬，加入蛋白酶抑制剂（如终浓度为 1mM 的 PMSF），冰浴10min，即为粗蛋白样品。
3、磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。例如：采用大肠杆菌表达某目标蛋白，500mL 发酵液收获 2g 湿重的菌体，通过预实验估算其目标蛋白产量为 10～20 mg，用户需要取 5mL 磁珠悬液用于目标蛋白的纯化。以下即以此为例进行详细说明：
（1）将磁珠产品置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取 5mL 磁珠悬液于 15mL 离心管中，进行磁性分离*， 弃上清液，从磁性分离器上取下离心管。
（2）加入 5mLBindingBuffer 到上述装有磁珠的离心管中，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮；进行磁性分离，移去上清液。重复洗涤 2 次。
（3）在磁性分离过程中，为了减少磁珠在使用过程中的损耗，待溶液变澄清后，盖紧离心管盖子，保持离心管 仍在磁性分离器上，手持磁性分离器与离心管上下翻转数次，使澄清的溶液涮洗离心管盖上残留的磁珠，静置片刻， 使溶液重新变澄清；以下同。）
