猪肝微粒体是药物代谢酶研究、体外代谢稳定性评价及药物-药物相互作用筛查的关键生物材料，制备质量直接影响酶活性、实验重复性与数据可靠性。猪肝微粒体为肝细胞内质网碎片，富含Ⅰ相代谢酶，需通过低温匀浆、差速离心与超速离心等步骤从新鲜猪肝中分离获得。应严格遵循快速处理、全程低温、无菌操作、避免溶血四大原则，才能获得高活性、低杂质的微粒体样品。
一、原料选择与预处理
肝脏来源与保存：
选用健康屠宰猪的新鲜肝脏，剔除结缔组织、血管及胆管；
立即浸入预冷含0.1MKCl或蔗糖的缓冲液，冰上运输；
清洗与称重：
用冰冷生理盐水反复冲洗至无血水，吸干表面水分后称重（通常10–50g/批次）。
二、组织匀浆与初步破碎
低温匀浆：
按1:3加入预冷匀浆缓冲液，使用玻璃/Teflon匀浆器在冰浴中匀浆10–15次；
避免泡沫与过热：
匀浆过程保持温度＜4℃，防止酶变性；禁止高速搅拌产生气泡导致蛋白氧化。
三、差速离心纯化
低速离心去核与碎片：
9,000×g，4℃，离心20分钟，弃沉淀；
超速离心收集微粒体：
上清液转移至超速离心管，100,000×g，4℃，离心60–90分钟；
小心弃上清（胞质蛋白），管底白色/浅黄色沉淀即为粗微粒体。
四、微粒体重悬与保存
重悬缓冲液选择：
用含20%甘油的50mM磷酸钾缓冲液轻柔吹打重悬，甘油可保护膜结构，–80℃长期保存；
蛋白浓度测定：
采用Bradford或BCA法测定蛋白含量，通常调整至5–20mg/mL用于后续实验；
分装冻存：
分装至无菌EP管，避免反复冻融，–80℃可稳定保存6–12个月。
