2026年02月11日 08:57:13 来源：上海昊扩科学器材有限公司 >> 进入该公司展台 阅读量：1
外泌体（Exosomes）是由内体衍生的小型脂质纳米颗粒，直径约 30-200 纳米，大多数活细胞会通过胞吐作用主动分泌外泌体[1]。无论是在病理还是生理状态下，外泌体的释放既可以是持续性的，也可以是诱导性的，且释放过程具有动态性、可控性和功能相关性。外泌体的分子组成与释放量取决于其来源细胞的状态。外泌体可从多种细胞系、原代培养物中分离获得，也可从血清、血浆、唾液等生物体液中提取。鉴于来源的多样性，外泌体具有多效的生理功能，且越来越多的研究表明，其在癌症、感染性疾病、神经退行性疾病等多种病理状态中发挥着重要作用。因此，外泌体成为液体活检方法中的关键研究对象[2]。此外，外泌体还可通过工程改造，成为具有潜力的药物递送载体[3]。
由于外泌体体积微小，从复杂的生物基质中分离外泌体颇具挑战性，且分离产量通常较低。在此背景下，Simple Western™成为研究外泌体的理想技术：该方法仅需 3 微升样品，且具备皮克级灵敏度，大幅减少了传统Western blot对所需外泌体量的要求。随后，可使用针对外泌体相关抗原的特异性检测抗体对之进行表征分析 —— 这些目标抗原既可以是外泌体的通用标志物，也可以是其来源细胞或体液所有的标志物。本实验方案中，我们将利用市售的外泌体标准品和抗体，通过Simple Western™检测外泌体的通用标志物和来源特异性标志物。
本篇文章介绍以“人血浆、人血清、人A549细胞（肺泡基底上皮腺癌细胞）"三种外泌体标准品为对象，验证下表中抗体的有效性的结果：
01. 通用外泌体标志物的表达
• Flotillin-1：作为经典通用标志物，在三种标准品中均检测到（图1A）。
• Alix：在三种标准品中均有表达，但A549细胞来源外泌体中表达量更高（图1D）。
02. 来源特异性标志物的表达
• Annexin V：作为凋亡标志物与血液抗凝蛋白，在A549细胞、血浆来源外泌体中检测到，在血清来源外泌体中未检测到（图1B）。
• EGFR（HER1）：仅在A549细胞来源外泌体中检测到，血清、血浆来源外泌体中无信号（图1C）。
图 1 利用Simple Western™测外泌体目标抗原。A：flotillin-1；B：Annexin V；C：EGFR；D：Alix。
03. 特殊处理需求的标志物
• CD63：仅当用PNGase F（去糖基化酶）处理外泌体标准品后，才可检测到信号，提示糖基化修饰对该标志物检测的影响（图2）。
04. 其他标志物验证
表2中其余抗体（如Annexin A2、HSPA8/HSC70、TSG101等）均通过Simple Western验证，可在对应外泌体标准品中检测到目标信号（图2）。
图2. 在血浆和 A549 细胞来源的外泌体标准品中，各目标抗原的检测泳道视图。
—— Simple Western技术核心价值 ——
(1) 微量高效：仅需3-5μL外泌体裂解液（传统WB需50μL+），适配珍贵样本；毛细管全流程减少样本损耗，适合低丰度膜蛋白。
(2) 高灵敏度：皮克级检测下限，可测CD63/Alix等，经PNGase F处理破解糖基化干扰，实现EGFR等特异性检测。
(3) 抗基质干扰：12-230kDa毛细管电泳去杂，外泌体裂解后可直接上机，无需繁琐纯化。
(4) 多重定量：单样本同步测8个靶点，符合MISEV标准，动态范围覆盖6个数量级。
(5) 自动化流程：3小时全自动化出结果，减少蛋白降解；每孔独立质控，满足外泌体制备QC。
(6) 精准定量：支持/相对定量，低样本量+高重复性，适配液体活检标志物开发，加速科研到临床转化。
* 本文转载自「ProteinSimple」微信公众号
* 参考文献:
1. Exosomes, D M Pegtel and S J Gould, Annual Review of Biochemistry, 2019, 88:487–514.
2. Extracellular vesicles – biomarkers and effectors of the cellular interactome in cancer, J Rak, Frontiers in Pharmacology, 2013, 4:21.
3. Exosomes as reconfigurable therapeutic systems, R Conlan, S Pisano, M Oliveira, M Ferrari and I Mendes Pinto, Trends in Molecular Medicine, 2017, 23(7):636–650.
▍关于ProteinSimple：
ProteinSimple 是美国纳斯达克上市公司Bio-Techne集团 (NASDAQ:TECH) 旗下的蛋白质分析品牌。“使蛋白质分析更简单"是ProteinSimple 一直以来的愿景。ProteinSimple长期致力于研发和生产更精准、更快速、更灵敏的创新性蛋白质分析工具，包括蛋白质电荷表征、蛋白质纯度分析、蛋白质翻译后修饰定量检测、蛋白质免疫检测技术如数字Western Blot和高灵敏微流控多重ELISA，以帮助生物制药、细胞与基因治疗、生物医学和生命科学等领域科学家解决蛋白质分析问题，加速药物研发效率，深度解析蛋白质和疾病的关系。作为ProteinSimple华东大区 (江、浙、沪、皖、山东) 的代理商，上海昊扩将为大家提供ProteinSimple旗下仪器设备。
▍关于上海昊扩：
上海昊扩科学器材有限公司成立于2019年，总部位于上海，是一家实验室设备/耗材及分析仪器的专业服务商。公司致力于为生物、医药、物性检测、化工分析、食品、工业生产等相关领域客户提供国内外高科技专业设备以及技术咨询服务。
