考马斯亮蓝G250是一种常用的染料,也被称为亮蓝G、亮蓝G250和酸性亮蓝G。它属于亮胺染料的一类,主要用于组织学和细胞学的染色。
考马斯亮蓝G250主要特点与用途:
1.蛋白质定量:考马斯亮蓝 G-250 常用于比色法定量蛋白质,尤其是在 Bradford法 中作为染料。该方法通过染料与蛋白质结合后,染料的吸光度变化来测定蛋白质浓度。此方法具有灵敏度高、操作简单等优点。
2.染色应用:它广泛用于 凝胶电泳染色,如 SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)中的蛋白质染色。染料与蛋白质结合后,能够在凝胶上形成可见的蓝色条带,便于观察蛋白质的分离情况。
3.可视化检测:在 Western blot 等实验中,考马斯亮蓝 G-250 可用于检测并可视化转移到膜上的蛋白质。在免疫印迹(Western blot)后,染料能够对蛋白质进行显色,帮助研究人员识别感兴趣的蛋白质。
工作原理:
考马斯亮蓝 G-250 的着色原理是基于其分子结构与蛋白质中的氨基酸(特别是芳香族氨基酸)发生相互作用。染料分子在结合蛋白质后,其紫外吸光度会发生变化,从而可以通过光度计测定吸光度值,从而间接反映蛋白质的浓度。
1.分子式:C46H48N3NaO7S2
2.颜色:染料溶液呈蓝色。
3.溶解性:可溶于水和醇类溶剂,水溶液呈酸性。
4.吸光度:在 595 nm 波长处具有强吸光度。
考马斯亮蓝G250使用步骤(Bradford法):
1.制备样品:将蛋白质样品溶解在适当的缓冲液中。
2.加入染料:向样品中加入适量的考马斯亮蓝 G-250 染料溶液。
3.反应时间:染料与蛋白质反应一定时间后,测量染料与蛋白质结合后的吸光度。
4.测量吸光度:使用分光光度计在 595 nm 波长下测量吸光度,计算蛋白质的浓度。
