细胞处理与探针孵育：
移除培养孔中的旧培养液，用 PBS 缓冲液洗涤细胞 2 次（去除培养基中杂质，避免干扰）；
每孔加入 100μL 荧光探针工作液，置于 37℃、5% CO₂培养箱中孵育 20-30 分钟（孵育时间根据细胞类型调整，确保探针充分进入细胞并活化）；
洗涤去除多余探针：
孵育结束后，移除探针工作液，用 PBS 洗涤细胞 3 次（每次洗涤后静置 1 分钟），去除细胞外未进入的探针（避免游离探针被 ROS 氧化导致假阳性）；
信号检测：
酶标仪检测（定量）：向每孔加入 100μL 新鲜培养液，将 96 孔板放入荧光酶标仪，测定每孔的荧光强度（FI 值），记录数据；
荧光显微镜观察（定性）：向培养皿中加入新鲜培养液，置于荧光显微镜下，在 FITC 通道观察细胞内荧光分布（荧光越强，说明 ROS 含量越高），拍照记录。
