CCK8细胞增殖毒性检测试剂盒的使用要求主要包括以下几个方面：
1.细胞接种
细胞数量：通常细胞增殖实验每孔加入约2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入5000～10000个细胞。具体数量需根据细胞的大小、细胞增殖速度等决定。
培养时间：一般建议贴壁生长24小时，让细胞充分贴壁且生长状态稳定，便于后续实验操作与结果分析。
接种混匀：接种时注意细胞悬液一定要混匀，避免细胞沉淀导致每孔中的细胞数量不等。可以每接种数孔即混匀一下，确保细胞分布均匀。
2.药物处理
设置对照：需设置空白组和对照组，空白组不加细胞只加培养基，用于扣除本底OD值；对照组加入细胞和培养基但不添加药物，用于对比药物处理组的细胞存活情况。
药物浓度与体积：根据实验目的和细胞特性，配制不同浓度的药物溶液，并按一定体积加入到相应的细胞孔中，如每孔加入10μL不同浓度的药物刺激液。
3.孵育条件
温度：一般哺乳动物细胞建议在37°C下进行孵育，其他种属的细胞可根据其特定的细胞培养条件选择合适的温度。
气体环境：需在含5% CO?空气及湿度的细胞培养箱中孵育，以维持细胞的正常生长环境。
孵育时间：根据不同实验细胞需求选择适当的孵育条件和时间。例如，加药后的孵育时间可设置时间梯度，通过观察数据的稳定性（RSD）、OD值的范围（一般在1.0左右）等来选择孵育时间。
4.CCK8试剂添加
添加时机：在药物孵育结束后，向每孔中加入适量的CCK-8溶液，一般为10μL。注意不要在一开始就加入CCK-8，否则会影响药物的作用效果和检测结果的准确性。
试剂用量：按照说明书的体系加入合适的CCK-8含量。如果细胞体系较大，可适当增加CCK-8的量，但要注意避免试剂过量或不足影响检测结果。
