浓度控制：
生物实验中，活细胞染色浓度通常为1-10μM，过高浓度会导致细胞渗透压改变或荧光淬灭；
临床眼底造影时，需严格按体重计算剂量（避免过量导致呕吐等不良反应），且需排除患者对荧光素的过敏史（罕见但存在过敏性休克风险）。
环境适配：
必须在中性/弱碱性环境中使用（如用PBS缓冲液溶解），酸性条件下会析出沉淀，影响荧光信号；
操作和储存时需全程避光（如使用黑色离心管、棕色试剂瓶），实验过程中缩短荧光暴露时间，避免淬灭。
干扰因素排除：
生物样本中若含有“高浓度血红蛋白、（如溶血样本、黄疸患者血液），会吸收荧光素的激发光或发射光，导致荧光信号减弱，需提前处理样本（如离心去除红细胞）；
工业检测中，若水体含大量悬浮物（如泥沙），会散射荧光，需先过滤水样再检测。
