中试型全自动多肽合成仪是用于多肽合成过程中的一个重要工具，尤其适用于中试和生产规模的多肽合成。其操作流程通常比实验室级合成仪要复杂一些，因为它需要满足较大规模的生产需求，涉及更多的设备和功能。以下是中试型全自动多肽合成仪的一般使用方法，具体操作可以参考设备的用户手册。
1. 准备阶段
原料准备：
氨基酸：根据合成的目标多肽序列准备所需的氨基酸，并检查每种氨基酸的保护基团（例如FMOC、Boc等）。
保护基团：根据合成需要选择合适的保护基团，确保它们能有效地保护氨基酸的氨基。
试剂准备：准备所需的化学试剂，包括偶联剂（如EDC、DCC）、去保护试剂（如氨水、氟氯酸等）、洗涤溶剂（如DMF、乙醇）等。
固相载体：选择合适的固相载体材料，如聚苯乙烯（PS）或聚乙烯二醇（PEG）等。
设备检查：
确保设备清洁且处于良好工作状态。检查反应槽、管道、加液系统等是否有残留物或堵塞。
校验仪器的温度、时间等控制参数是否正常。
2. 系统设置
设定合成参数：
氨基酸序列输入：根据目标多肽的氨基酸序列，通过设备的控制面板或软件输入每个氨基酸的顺序。
合成程序选择：选择适合合成任务的合成程序（例如常规合成模式或加速模式），并根据需要调整程序中的参数，如温度、时间、加液速率等。
反应时间和加液量：设定每个反应步骤的时间，确保每次加氨基酸和偶联剂的时间、量是准确的。
循环设置：确保合成过程中每个步骤（去保护、偶联、洗涤等）的时序安排正确。
试剂装载：
氨基酸溶液：将氨基酸溶液按比例加入反应槽中。根据合成任务，选择正确的溶剂（如DMF、DMSO等）稀释氨基酸。
偶联剂和去保护试剂：装载偶联剂和去保护试剂，确保试剂的浓度和量符合合成需要。
洗涤液：准备洗涤液并加入反应槽。
3. 合成过程
开始合成：启动设备，仪器会根据预设的程序自动进行氨基酸的逐步合成。每个步骤通常包括：
去保护基团：使用碱性溶液（如氨水）去除前一轮合成中氨基酸的保护基团。
偶联反应：加入新氨基酸并与肽链连接，通过偶联剂促进氨基酸间的酰胺键形成。
洗涤：反应完成后，加入洗涤溶液（如DMF、乙醇等）清除未反应的试剂和副产物，确保反应的纯度。
这些步骤会按照合成程序自动完成。一般情况下，每个合成步骤的时间控制为几分钟到几十分钟不等，具体时间依据氨基酸的种类和反应条件来设定。
循环合成：每次完成一个氨基酸的加入后，设备会继续进行下一步，直到合成完整个多肽。
4. 脱离固相载体
脱离肽链：合成完成后，多肽链需要从固相载体上脱离。此过程通常使用强酸（如三氟氯烷、氟氯酸等）进行。
脱保护基团：如果有保护基团在肽链的C端，需要使用适当的试剂去除。
清洗：通过多次洗涤，去除脱离过程中的酸和其他残留物，确保肽链纯净。
5. 纯化与分析
纯化：合成后的多肽需要通过液相色谱（HPLC）进行纯化，去除未反应的氨基酸、杂质和副产物。
鉴定：通过质谱（MS）或氨基酸分析方法确认多肽的分子量和序列，确保其正确性。
6. 清洁与维护
清洗设备：每次使用后，设备需要清洗。主要清洗反应槽、加液系统、管道等，确保没有试剂残留。
使用适当的溶剂（如乙醇、DMF等）清洗设备。
对过滤器和管道进行定期检查，避免堵塞。
定期维护：定期检查设备的各个部件，如加液泵、温控系统、压力传感器等，确保设备长期运行稳定。
7. 注意事项
操作安全：使用强酸、强碱等化学试剂时，务必佩戴防护设备（如手套、护目镜等），并确保实验室通风良好。
反应监控：定期检查设备的反应过程，确保每个步骤的顺利进行。如果合成过程中发生异常，及时进行调整。
试剂储存：氨基酸、偶联剂、保护基团和其他试剂需要根据说明书存储在合适的环境中，避免因存储不当导致失效。
总结：
中试型全自动多肽合成仪在中试和生产阶段具有很大的优势，能够实现高效、自动化的多肽合成。通过合理设定合成参数、精确控制每个步骤的条件、并进行后续的纯化和鉴定，可以高效地合成出目标多肽，并确保其质量和产量。
