液相色谱柱的正确选择和使用
2025年03月11日 08:13:27
来源：成都摩尔科学仪器有限公司 >> 进入该公司展台
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高效液相色谱柱的常规使用含有：加装保护柱，样品和流动相，净化样品，避免过高的柱压，注意室温和酸碱度，正确及时的冲洗等。
一、加装保护柱
保护柱的作用是用来过滤一些不干净的流动相（拉圾）同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。虽然现在市面上的液相色谱仪在流动相的吸入口、进样阀部位和液相色谱柱的两端都装有1、2μm等不一样的过滤器,但过滤器不能******清除化学污染只能除去不溶性颗粒,所以,加装保护柱是必要的,特别是在需要分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱的措施。
保护柱填料应与分析柱一致,粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品,经过一定次数的样品分析(50～100次)后,出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时,应考虑更换保护柱。
二、过滤流动相和样品
流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成,原则上,所有经过色谱柱的流动相均应过滤,但在实际操作上应视具体情况而有所区别:当有机溶剂用色谱纯级,水用石英亚沸水或其它超纯水时,在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时,过滤并无更多实际意义。
当流动相中含有缓冲盐时,则过滤是必要的,如前所述,当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异,夏季一般不超过48 h,冬季一般不超过一周)后,在使用前还应重新过滤。
所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0. 45μm ( 0. 22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系,二者不可混用,以防止滤膜溶解而造成污染。
装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换,以避免滤器因过载而起不到过滤作用。
三、净化样品
当样品中含有对液相色谱柱有损害的化学成分,如产生******性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质,以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
四、避免过高的柱压
虽然高效液相色谱柱能耐受的压力可达6000 p si (磅/平方英寸) ,但过高及过大的压力变化均会缩短液相色谱柱的寿命,避免的方法是
(1)色谱柱柱子压力太大时,尽可能采用较小的流速,以不超过色谱柱******允许压力的一半为宜。
( 2)当流速较大时,应采取流速梯度的办法使流速分步到位。
(3)使用手动进样阀时,进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使色谱柱报废。当使用多柱联用时,色谱柱柱子的切换要避免在高压下进行。
五、注意温度和酸碱度
一般以硅胶为基质的液相色谱柱******使用温度不超过60℃,以低于40℃为宜,特别是在流动相pH接近使用限度时,更应降低使用温度。
温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解,从而使填料性质改变,柱床塌陷,降低柱效,改变峰形。
目前的键合硅胶液相色谱柱标示的pH适用范围可达2～10,但在实际使用时应避免******的pH条件,特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用 ,如必须要在******的pH条件下使用时,可通过以下方法避免柱损害:
( 1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相
(2)降低使用温度
(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”******清洗。
六、正确及时的冲洗
开始试验前,应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱,如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。液相色谱柱柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶,如不能混溶,要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。
异丙醇是******能与各种溶剂混溶的试剂,可作为中介流动相使用。反相键合硅胶柱适宜的保存环境是纯甲醇,如分析用流动相为缓冲液2有机溶剂,可先用较低甲醇含量( < 20% )的甲醇2水置换掉原来的纯甲醇,再进分析用流动相,以防止在柱内发生盐的沉淀;
试验结束后,要及时用适当的溶剂冲洗系统并***终过渡到纯甲醇冲洗,对于含有缓冲盐的流动相,******的办法是先用与分析用流动相组成******相同但不含缓冲盐的溶液进行冲洗,再逐步过渡到纯甲醇冲洗。
多数报道冲洗液体积大约为柱容积的15～20倍,但***终要以基线是否平直、压力是否稳定决定。
有些厂家的液相色谱柱系统标明了流动相中有机相的******使用浓度为≥5% ,我们使用的时候需要注意
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