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操作流程:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
优点如下:
1、快速简便:操作时间短,48-50T,可测40例样本左右,96-100T,可测80例样本左右;
2、取样量微:常规操作取样量50l, 酶标仪操作仅需5l即可检测,部分试剂盒取样多少请;
3、稳定性好:试剂盒2~8℃存放3个月有效;
4、再现性好:20倍稀释线性仍然良好;
5、回收试验: X =99%;
6、受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强;
7、测试面广:可测动物血清(浆)、组织、各种体液、灌流液、各种培养细胞以及细胞培养上清液等,部分试剂盒适用于检测植物,欢迎
仪器:
1、分光光度计/酶标仪/生化分析仪(比色测定波长为550nm)
2、恒温水浴箱或气浴箱 (孵育温度为37℃)
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
(1)请参照相关法规、文献、MSDs等信息,理解并掌握好试剂的特性,再进行安全操作。
(2)通常购买试剂时一定要想到--次性用完。若估算不足有剩余的话,更加注意其他保管和管理。
(3)万一-试剂操作者并非专业技术人员。必须在专业人士的指导监督下进行操作。对于使用后的废弃物,不要或者旧的试剂,应按照相关法律法规正当处理。
(4)购买后,请务必确认标签上的注意事项;做好预防颠倒,摔坏的措施和管理体制;在使用前再次确认标签上的注意事项,做好必要的安全对策;对没有标明其危害特性、有害特性的,也要慎重地进行操作;必须带好防护用具,小心翼翼进行操作。
生化试剂的种类与等级说明:
(1)免疫试剂包括抗体及抗血清、正常血清及补体、抗原、免疫组织化学研究用试剂、细胞培养用试剂、细胞分离试剂、凝胶内扩散法及电泳试剂等。
(2)基因工程用试剂包括基因表达与基因重组、人工合成蛋白、激素、核酸合成试剂、内切酶等。
(3)诱变剂和主要供测定工作场所与生活环境中的毒物质的致癌性与化学毒物的致突变性。
(4)工业用化学品包括试制开发的工业用化学品,有四千种以上,还在不断增加。
样本收集与前处理:
血清(浆)可直接测定。
红细胞:需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本:可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液,离心取上清测定。
培养细胞、细菌、植物组织:常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理:参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。