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基因PCR测定试剂盒的实验过程

2024年09月29日 17:19:18      来源:明通甄选 >> 进入该公司展台      阅读量:5

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  基因PCR测定试剂盒运输及保存:低温运输,-20℃保存,有效期一年。使用本试剂盒提供的阳性对照时,由于其浓度较高,一定要注意不要污染其他试剂和成分。在专门的区域操作。
  实验过程:
  一、试剂准备
  1.DNA模板
  2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
  3.10×PCR Buffer
  4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
  5.Taq酶
  二、操作步骤
  1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
  10×PCR buffer 5μl
  dNTP mixl 4μl
  引物1(10pM)2μl
  引物2(10PM)2μ
  Taq酶(2U/μl)1μl
  DNA模板(50ng-1μg/μl)1μl
  加ddH2O至50μl
  视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
  2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃40s→58℃30s→72℃60s,循环30-35次,后在72℃保温7min。
  3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
  4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
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