兔ELISA试剂盒主要由包括试剂盒盒体、酶标板、标准品、样品、懈氏试剂、缓冲液、洗涤液、显色剂和停止剂等组成。试剂盒的盒体上标有试剂盒编号、试剂名称、制造商等基本信息,用于方便用户识别和区分不同试剂盒。
酶标板是试剂盒中的核心部件,通常采用96孔板的形式,每一孔都涂有特定的抗原、抗体或其它蛋白质。标准品是与待检样品相同或类似的蛋白质,用来检测和定量待测样品中的抗体或抗原。样品是待测标本,可以是免疫学实验室中的兔血清,也可以是其它液体、组织、细胞等。
免疫酶标法的原理是将待测样品加到涂有抗原或抗体的酶标板中,通过特异性反应将待测物质捕获在酶标板上;然后加入可与待测物质结合的标记物,如酶、金标等,使其与被捕获的物质产生特异性结合;加入显色底物如TMB,用于检测标记物的酶活性,产生颜色变化。液体样品从血浆、血清或其它生物样品中分离出来,加到酶标板中,与涂有同种或异种来源的抗原或抗体结合,用酶标法检测其是否含有特异性免疫球蛋白、抗体等。
在试剂盒中,常用的酶标法包括直接法、间接法、竞争法、夹心法等。在直接法中,样品直接与定量抗原或抗体反应;在间接法中,用兔血清中特异性抗体与抗原反应,然后用特异性标记分子如HRP等检验抗原特异性的抗体;在竞争法中,添加适当浓度的特异性抗体、酶标记的抗原及待测物竞争反应,以判断待测物在样品中的存在量;在夹心法中,兔抗体与特定抗原反应后,用兔抗体和酶标记的抗兔IgG标记。