T7体外快速转录试剂盒是一种基于T7 RNA聚合酶的RNA体外转录试剂盒,它利用含有T7启动子的模板DNA,以NTP(核苷三磷酸)为底物,从T7启动子下游开始合成与模板DNA中一条链互补的RNA,从而简单快速地获得大量的RNA分子。
T7体外快速转录试剂盒的使用说明:
模板准备:
必须使用线性化的DNA模板。如果是质粒DNA,则必须先用适当的限制性内切酶切成线状。
需要转录的DNA序列的上游必须有T7启动子。如果模板是PCR产物,则可以在设计引物时将T7启动子序列加上。
必须保证DNA模板中没有RNase污染。
反应体系:
通常包括T7转录预配液、T7 RNA聚合酶混合液、模板DNA和RNase-free水等。
不同品牌的试剂盒具体成分和用量可能有所不同,需参照说明书进行操作。
反应条件:
一般在37℃下进行保温反应,时间根据试剂盒说明和实验需求确定。
延长保温时间并不能大幅提高产量。
产物检测与纯化:
反应结束后,可通过电泳检测RNA产物。
如果需要去除DNA模板,可以使用DNase进行消化。
纯化RNA时,可采用酚/氯仿抽提、柱纯化或磁珠纯化等方法。