总膳食纤维（TDF）的国标测定方法（符合AOAC）

空白实验应该在整个实验过程中进行，*后要从结果中扣除以去掉试剂等因素对结果的影响。将1克样品，称重精度到0.1毫克,在400毫升的烧杯中,混合到50毫升PH为6的磷酸缓冲溶液中,加磁力搅拌子,加100微生的热稳定的α-溶液,混合,盖上铝箔。放到100度的水浴中，让样品温度保持在95—100度保持15分钟，控制好温度，然后从水浴中移出，冷却到室温。

用10毫升的0.275N的氢氧化钠溶液调节PH到7.5,向GDE中添加冷水将温度降到60度,加100微升的蛋白酶溶液(50毫克放在1毫升磷酸盐缓冲液中).烧杯盖上滤箔连续搅拌的情况下在60度时培养30分钟。冷却到室温，用0.325N的盐酸调节PH到4.0—4.6,用PH计控制PH值。

添加300毫升的淀粉葡(萄)糖苷酶（ 葡萄糖 ）溶液，盖上铝箔在连续搅拌的情况下60度水浴培养30分钟。拿掉搅拌子，280毫升的95%的乙醇预热60度，在室温下沉降60分钟。干净的玻璃坩埚，放在525度的马弗炉烘干1小时，冷却到室温，用水清洗，在空气中晾干。

添加0.5克的硅藻土,玻璃坩埚在130度的烘箱中恒重一个小时,精度0.1毫克。同硅藻土一起称重并放在CSF6 （FIWE6）的过滤器中，利用真空。用漏斗转移酶消解完的沉淀物，滤出液用导管进行收集。

用20毫升的78%的乙醇溶液洗涤沉淀物3次，10毫升的95%的乙醇溶液洗涤2次，10毫升的丙酮溶液洗涤2次。如果胶状的滤膜使的过滤能力下降，保持液体状态，用细微的空气来吹表面（仪器上操作），整个清洗过程需要半个小时。

在105度的烘箱中（70度的真空箱中）将玻璃坩埚连同沉淀物和硅藻土一起烘干一个晚上，冷却到室温，称重精度为0.1毫克。沉淀物的重量是*终的重量减掉坩埚的重量和硅藻土的重量（需要的重复样）。

其中一个沉淀物的样用凯氏方法分析不能消化的蛋白含量（N*6.25）,**个沉淀物的样在525度的马弗炉中烘干5个小时,在干燥箱中冷却称重(精度0.1毫克),灰份的重量是前步的总重量减掉坩埚和硅藻土的重量后剩下的重量。

计算

%空白中的蛋白百分含量（SB）=空白中的蛋白含量/空白的残留量*100

%空白中灰分含量（CB）=空白中的灰分量/空白的残留量*100

空白量=空白中的残留物*[1-（PB+CB）/100]

%样品的蛋白含量（SP）=样品中的蛋白量/样品残留物量*100

%样品灰分含量（SA）=样品中灰分量/样品残留物量*100

%TDF={残留物量-[（PC+CC）*残留物量/100]-空白量}/样品重量*100

简化为：

%TDF=[残留量*（100-PC-CC）-空白量]/样品重量

注：这里的残留量是指重复空白或者样品的所获得的平均残留量   这里的样品量是指两个样品的平均重量。

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