抗的薄层色谱和含量测定

　　【摘要】目的建立抗的质量标准。方法采用薄层色谱法对**中黄芩、甘草、桔梗进行鉴别；用高效液相色谱法测定制剂中的含量。采用AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-水－磷酸(43∶57∶0.2)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μL。结果薄层色谱专属性强；的线性范围为0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,平均加样回收率为101.80%,RSD＝1.86%(n＝6)。结论该方法简便、准确,重现性好,可作为抗的质量控制标准。
　　
　　【关键词】抗；；黄芩；甘草；桔梗；高效液相色谱法
　　
　　Abstract：ObjectiveToestablishthequalitystandardforKangganmaoGranule.MethodsRadixscutellariae,radixetrhizomeglycyrrhizaeandradixplatycodonisintheprescriptionwereidentifiedbyTLC.ThecontentofthebaicalinwasdeterminedbyHPLC.ThecolumnofAichromBond-AQ-C18(4.6mm×150mm,5μm)wasused.ThephasewasCH3OH-H2O-H3PO4(43∶57∶0.2),withtheflowof1.0mL/min,thecolumntemperatureof30℃,andpeaksweredetectedat280nm.ResultsThecharacteristicofidentificationbyTLCwasdistinctandhighlyspecific.Thelinearrangeofbaicalinwas0.0496～0.2976μg,r＝0.9997,theaveragerecoverywas101.80%,RSD＝1.86%(n＝6).ConclusionThemethodwaseasytooperatewithaccurateresultandgoodreproducibility.Itcanbeusedeffectivelyforthequalitycontrolofthepreparation.
　　
　　Keywords：KangganmaoGranule；baicalin；radixscutellariae；radixetrhizomeglycyrrhizae；radixplatycodonis；HPLC
　　
　　抗**由金银花、连翘、黄芩等9味药材组成。用于风热感冒,发热恶风,鼻塞**,咽喉肿痛。本试验对方中黄芩、甘草、桔梗进行了鉴别,同时用HPLC法测定了制剂中的含量,建立了可靠、准确、专属性强的质量控制方法。
　　
　　1仪器与试药
　　
　　日本岛津LC-10ADVP高效液相色谱仪,岛津SPD-10AVP紫外检测器,HW色谱工作站。黄芩药材购自淮安市药材公司(由江苏某公司提供),经南京中医药大学王春根教授进行品种鉴定。对照品购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用,批号10715-200212)。10批产品由江苏某公司生产并提供(批号分别为050601、050602、050603、050604、050605、050701、50702、050703、050704、050705)。甲醇、乙醇等试剂由上海久亿化学试剂有限公司生产,均为分析纯或色谱纯。
　　
　　2定性鉴别
　　
　　2.1黄芩薄层色谱鉴别
　　
　　取对照品,加甲醇制成每1mL含1mg的溶液,作为对照品溶液。取本品10g,加甲醇30mL,超声处理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加水5mL,加热使溶解,趁热滤过,滤液用盐酸调节pH值至1～2,摇匀,80℃保温30min,放冷,离心15min,残渣加甲醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液[1]。取除黄芩以外的其它8味药材按**比例制得阴性样品10g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
　　
　　吸取上述3种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
　　
　　2.2甘草薄层色谱鉴别
　　
　　取甘草对照药材5g,加盐酸1mL及石油醚(60～90℃)25mL,加热回流1h,滤过,滤液挥干,残渣加石油醚(60～90℃)1mL使溶解,作为对照药材溶液[2]。取本品15g,加盐酸2mL及石油醚(60～90℃)40mL,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除甘草以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
　　
　　吸取上述3种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90℃)-甲苯-乙酸乙酯-冰乙酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%的磷钼酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
　　
　　2.3桔梗薄层色谱鉴别[3]
　　
　　取桔梗对照药材5g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液25mL,加热回流1h,放冷,用提取2次,每次20mL,合并液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解,作为对照药材溶液。取本品15g,加7%的硫酸乙醇-水(1∶3)混合液40mL,用与对照药材溶液相同的方法制得供试品溶液。取除桔梗以外的其它8味药材按**比例制得的阴性样品15g,用与供试品溶液相同的方法制得阴性对照液。
　　
　　吸取上述3种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以-(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性对照液无此斑点。
　　
　　3含量测定
　　
　　本方中黄芩用量较大,且其中含有的化学性质稳定,测定方法简便,故在含量测定时选择为指标[4]。
　　
　　3.1色谱条件
　　
　　AichromBond-AQ-C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm)；流动相：甲醇-水-磷酸(43∶57∶0.2),流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：280nm；进样量：10μL。
　　
　　3.2对照品溶液的制备
　　
　　精密称取在五氧化二磷干燥器中真空干燥至恒重的对照品,加甲醇制成每1mL含0.496mg的溶液,摇匀,作为母液。从中吸取5mL,用甲醇稀释至50mL,制成每毫升含0.0496mg溶液,备用。
　　
　　3.3供试品溶液的制备
　　
　　取10个批号的抗,每批取2份,研细,每份各取0.2g,精密称定,置具塞三角烧瓶中,精密加入甲醇10mL,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
　　
　　3.4系统适应性考察
　　
　　分别精密吸取对照液和各供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪。理论塔板数以峰计,不低于2500,此时,峰与其它相邻峰基线分离,分离度R>1.5,保留时间约为14min。色谱图见图1。
　　
　　3.5线性关系的考察
　　
　　分别精密吸取浓度为0.0496mg/mL对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0mL定容至10mL量瓶中,摇匀,制成4.96、9.92、14.88、19.84、29.76μg/mL的系列溶液。
　　
　　精密吸取5个不同浓度的对照液各10μL,注入液相色谱仪,各进2针。以浓度C为横坐标,以平均峰面积Y为纵坐标进行线性回归,得回归方程：C＝2×10-4A＋0.7879,r＝0.9997,线性范围为0.0496～0.2976μg。
　　
　　3.6精密度试验
　　
　　精密吸取浓度为9.92μg/mL对照品溶液10μL,连续进样5次,测得峰面积值RSD＝2.48%。
　　
　　3.7稳定性试验
　　
　　精密吸取批号为050705的**个供试液10μL,每间隔2h进一针,连续考察10h,结果峰面积值的RSD＝2.76%,表明在10h内基本稳定。
　　
　　3.8专属性试验
　　
　　在与样品测定相同的条件下,精密吸取黄芩阴性对照液10μL,注入液相色谱仪,连续进3针,阴性无干扰。说明在抗中,的专属性较强。
　　
　　3.9重复性试验
　　
　　取同一批号(050705)样品0.25g,共6份,精密称定,按样品测定项下的方法测定,测得样品中指标成分的含量,RSD＝2.12%,结果表明重复性良好。
　　
　　3.10加样回收率试验
　　
　　取批号为050705的抗0.25g,精密称定6份,各精密加入浓度为29.76μg/mL的对照液2.5mL,分别用与“3.3”项下相同的方法制得供试液。并用与“3.11”项下相同的方法测得样品中指标成分的含量,结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)
　　
　　3.11样品测定
　　
　　精密吸取各供试液10μL,注入液相色谱仪,分别进2针。采用标准曲线法定量,根据取样量和稀释度,计算含量,结果见表2。表2样品含量测定结果(略)
　　
　　由实验结果可知,仪器的精密度、指标成分的稳定性、方法的重现性和加样回收率等均较好,符合定量要求。根据以上测定结果,暂定每1g抗中含黄芩以(C21H18O11)计,不得少于0.49mg。
　　
　　4讨论
　　
　　上述实验中,黄芩、甘草、桔梗的鉴别专属性强,重现性好,操作简便,故正式纳入抗质量标准中；而荆芥、的鉴别,因阴性有干扰,专属性不强,故未纳入质量标准中。