培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需培养基重新悬浮细胞。
3.采用、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低 1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。
描述:(1)公司可提供新鲜或冻存细胞株;(2)细胞株数量约 5×105/瓶;(3)不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
发货:客户可根据自身科研项目的需要选择不同类型的细胞培养瓶和相应的细胞密度。发货的新鲜细胞还包含:1、发货的T25方瓶中装满50ml左右培养基;2、说明书及注意事项;3、售后服务标准。
保存和应用:客户可以根据自己的需求选择新鲜或者冻存的原代细胞,如是新鲜细胞株,客户收到细胞后应立即将其放入CO2细胞培养箱内静置后2-3h,再进行后续的实验操作。如是冻存细胞,客户收到细胞后应立即将其放入液氮、-80℃冰箱或立即进行复苏。该细胞只可用于科研,不得用于临床应用。
产品名称 | 规格 | 货号 |
MGC80-3人胃癌细胞说明书 | T25m2 | YS-X6337 |
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
A Beta1-40 ELISA Kit 大鼠β淀粉样蛋白1-40氨基聚苯烯微球 diameter 5.0-5.9μm,5% w/v 二溴双(三苯基磷)化镍 99%Klebsiella pnenmoniae
8-OHdG(Mouse 8-Hydroxy-desoxyguanosine) ELISA Kit 小鼠8羟基脱氧鸟苷氨基聚苯烯微球 diameter 6.0 - 6.9μm,5% w/v(S, S)-环己二胺 98%Klebsiella spp.
8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit 人8羟基脱氧鸟苷氨基聚苯烯微球 diameter 7.0 - 7.9μm,5% w/v(R, R)-环己二胺 98%Koi Herpesvirus(KHV)Sph
8-OHdG ELISA Kit 大鼠8羟基脱氧鸟苷氨基聚苯烯微球 diameter 8.0 - 8.9μm,5% w/v 2-(二苯基膦基)苯酸 97%Koi Herpesvirus(KHV)
8-iso-PG(Mouse 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 小鼠8异前列腺素氨基聚苯烯微球 diameter 9.0 - 9.9μm,5% w/v 2-(二苯基膦基)胺 95%Kudoa septempunctata
8-iso-PG(Human 8-iso prostaglandin) ELISA Kit 人8异前列腺素氨基聚苯烯微球 diameter >10μm ,2.5% w/v2-(二-叔基膦)-2'-(N,N-二基氨基)联苯 98%Lactobacillus salivarius
8-iso-PG ELISA Kit 大鼠8异前列腺素羧基聚苯烯微球 diameter 0.05 - 0.1μm ,2.5% w/v 2-二环己基磷-2',4',6'-三异基联苯 97%Lactococcus lactis
8-epi-PGF2 Alpha(Human 8-epi-prostaglandin F2alpha0 ELISA Kit 人8-异构前列腺素F2α羧基聚苯烯微球 diameter 0.2 - 0.5μm ,2.5% w/v 4,4'-二基-2,2'-联吡啶 98%Lactococcus spp.
8-epi-PGF2 Alpha (Rabbit 8-epi-prostaglandin F2alpha) ELISA Kit 兔8-异构前列腺素羧基聚苯烯微球 diameter 0.6 - 1.0μm,2.5% w/v2-双环己基膦-2',6'-二氧基联苯 95%Lawsonia spp.
6-OHDA(Human 6-hydroxydopamine) ELISA Kit 人6-羟多巴胺羧基聚苯烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm,5% w/v(1,5-环辛二烯)二氯化钯(II) Pd 37.3%legionella pneumophila
MGC80-3人胃癌细胞说明书粘溴酸 99% 亚异基二酸二酯桉树叶提取物Human CTSL1(Cathepsin L1) ELISA Kit
Human C4A(Complement C4-A) ELISA Kit
酰溴 95% 4-氯苯酰酸酯根莲解毒散Human CKM(Creatine kinase M-type) ELISA Kit
Human EDN1(Endothelin-1) ELISA Kit
皂土(膨润土) Bentone SD-1,适于中至低极性溶剂 3,4-亚基二氧苄肼对氯苯硼酸Human SOD1(Superoxide dismutase [Cu-Zn]) ELISA Kit
Human CASP9(Caspase-9) ELISA Kit
皂土(膨润土) Bentone SD-2,适于中高极性溶剂 2,4,6-三氟苯腈新良蛋糕粉Human NAMPT(Nicotinamide phosphoribosyltransferase) ELISA Kit
Human BMP-6(Bone morphogenetic protein 6) ELISA Kit
BENTONE 27,应用在中等到高等极性溶剂 2,4-二基-3-吡咯羧酸酯垂盆草提取物Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) ELISA Kit
Human CD44(CD44 antigen) ELISA Kit
皂土(膨润土) BENTONE 38,应用在极性溶剂体系中 3,5-二基-1H-吡咯-2-酸酯苦杏仁苷Human C7(Complement component C7) ELISA Kit
Human Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2) ELISA Kit
锌粒 99.99% metals basis [(苯硫基)亚基]双(三环己基膦)二氯化钌迷迭香酸Human CD86(T-lymphocyte activation antigen CD86) ELISA Kit
Human LPA(Lipoprotein a) ELISA Kit
二苯基二硒 99% 2,4-二氯-5-氟苯醇二杨梅素Human C3(Complement C3) ELISA Kit
Human CP(Ceruloplasmin) ELISA Kit
99% 2-氰基-4-氧基苯醛科罗索酸Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit
Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit
盐酸盐 ≥99.0% (HPLC) 6-氨基吲哚-1-酸叔酯芹菜素Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit
Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit
所有评论仅代表网友意见,与本站立场无关。