小鼠乳腺癌高转移细胞 , MA-891细胞5×10^5以上/1ml
对于大多数细胞研究工作者来说，小鼠乳腺癌高转移细胞 , MA-891细胞污染那可是个糟糕的事情，也是比较容易出现的情况，我们如何防范，如何避免，是我们要学习和掌握的。
DTT, 25g 25 g
HK/G6P-DH, 15 mg 15 mg （5 ml）
Histone 10 mg
小鼠乳腺癌高转移细胞 , MA-891细胞Expand HiFi PCR System dNTPack 500 U （2 x 250 U）
CHAPS, 10g 10 g
Amyloglucosidase from Aspergil 3,500 U
Chromozym TH 20 mg
NAD, approx. , Grade I, ly 1 g
Agarose Gel DNA Extraction Kit 1 kit （max. 100 reactions）
 下面我们对细胞培养中常见的污染情况，做个总结：
1）原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，zui终形成恶性循环。
2）霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒高盐液体,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或或或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，或或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作。
3）细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！ 可在培养液中加相应的抗生素处理
4）黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
5）真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
6）支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中zui常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢。用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长就是操作的问题。 也可以在培养基中事先加入双抗（和氨苄）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。1、孵箱应定期用三氧机消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。
NADH, approx. 98%, 1 g 1 g
Tris-HCl 500 g
Expand HiFi PCR Sys., 100 u 100 U
Trypsin,Sequencing Grade,modif 4 x 25 µg
Phosphoglucose Isomerase （PGI） 10 mg （1 ml）
Agarose LE, 100g 100 g
PCR Nucleotide MixPLUS （200 re 200 µl （2 x 100 µl） （for 200 reactions of 50 µl final reaction volume）
L-LDH, （rabbit muscle）, 10 mg 10 mg （2 ml）
Luciferase from Photinus pyral 1 mg protein
7-Deaza-2'-deoxy-GTP, Di-Li 2 µmol （200 µl）
Taq DNA Polymerase,5 units/Ál 100 U
b-Glucuronidase, 5ml 5 ml
Formate Dehydrogenase, 80 u 80 U
Plasminogen 20 U
Glutathione Reductase （GR）, 5 5 mg （1 ml）
Pwo DNA Polymerase, 100 U 100 U
BSA Fraction V, 100g 100 g
HP PCR Template Preparation Ki 1 kit （100 purifications）
ATP, disodium salt, special qu 1 g
Proteinase K,recomb.,PCR Grd. 5 ml
Poly （A） 100 mg
Water, PCR Grade （1x25ml） 25 ml （1 x 25 ml）
Poly [d（I-C）] 10 A260 units
Chromozym PL 20 mg
Proteinase K,recomb.,PCR Grd.S 25 ml
Streptavidin Magnetic Particle 2 ml
Titan One Tube RT-PCR Kit 50 reactions, including 10 control reactions
FastStart TaqMan Probe Master 2 x 1.25 ml （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
FastStart Universal Probe Mast 2 x 1.25 ml （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
G6P-DH, Grade I 5 mg （1 ml）
PCR Core Kit 1 kit （for 100 reactions of 50 µl final reaction volume）
GOT, 2 mg 2 mg （1 ml）
L-LDH, （rabbit muscle）, 25 mg 25 mg （5 ml）
G6P-DH, Leuc. mesenteroides, 1 1,000 U （1 ml）
dITP 25 µmol （250 µl）
QUICK SPIN G-25 RNA （100621） 2 20 columns
QUICK SPIN G-50 RNA（100411） 20 20 columns
Phosphoenolpyruvate, monopotas 1 g
DNA Isolation Kit for Mammalia 1 kit （25 purifications of 10 ml samples）
Poly （A） x （dT）_15 5 A260 units
Poly （dA） 5 A260 units
Creatine Kinase （CK）, 500mg 500 mg
HK/G6P-DH, 30 mg 30 mg （10 ml）
FastStart SYBR Green Master 5 5 ml （4 x 1.25 ml） （for 200 reactions of 50 µl final reaction volume）