人结肠腺癌细胞,RKO细胞 RKO 贴壁上皮细胞
(1)细胞背景
RKO是一个低分化的结肠癌细胞系。 RKO细胞含有野生型P53,但缺乏人甲状腺受体核受体(h-TR beta 1)。 RKO细胞的P53蛋白的水平高于RKO-E6细胞。 RKO细胞系是RKO-E6和RKO-AS45-1的亲本细胞系。 该细胞系在裸鼠中成瘤,且在软琼脂中形成集落。
(2)客户自备试剂
1)PBS
2)DMEM(高糖)培养基+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
3)0.25% (W/V)(含0.02% EDTA)
(3)细胞背景
1)人结肠腺癌细胞,RKO细胞生长方式:贴壁
2)种属:Homo sapiens 人
(4)培养条件
1)培养基:DMEM(高糖)培养基+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
2)温度:37.0°C
3)气体:空气 95%,CO2 5%
(5)培养方法
收到细胞后,在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况:
如果细胞未长满,用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内,严格无菌操作,打开细胞培养瓶,留10ml培养液继续培养。
如果细胞已长满(达80-90%)。即可进行传代,具体步骤如下:
1)弃去培养液,用PBS洗1-2次。
2)向瓶内加入1.0-2.0ml液,在倒置显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆,迅速拿回操作台,吸取,加含有6ml 含10%血清的培养液,轻轻吹打细胞。
3)加入等量的的培养液,轻轻吹打混匀后吸出一半,分到新的培养
4)传代比例:1:2-1:3
(6)常见问题及解决方案
1)培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。
2)细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,我们的技术人员会一直跟踪指导,直到问题解决。
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