人高转移肺癌细胞，95-D细胞     95-D     贴壁上皮细胞
（1）细胞背景
这是一株高转移肺癌。
（2）客户自备试剂
1）PBS
2）RPMI-1640培养基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
3）0.25% （W/V）（含0.02% EDTA）
（3）人高转移肺癌细胞，95-D细胞细胞背景
1）生长方式：贴壁
2）种属：Homo sapiens 人
（4）培养条件
1）培养基：RPMI-1640培养基（不含Hepes）+ 10%胎牛血清+ 1%双抗
2）温度：37.0°C
3）气体:空气 95%，CO2 5%
（5）培养方法
 收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
 如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，留10ml培养液继续培养。
 如果细胞已长满（达80-90%）。即可进行传代，具体步骤如下：
1）弃去培养液，用PBS洗1-2次。
2）向瓶内加入1.0-2.0ml液，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，吸取，加含有6ml 含10%血清的培养液，轻轻吹打细胞。
3）加入等量的的培养液，轻轻吹打混匀后吸出一半，分到新的培养
4）传代比例：1:2-1:3
（6）常见问题及解决方案
1）培养瓶有破裂，培养液有漏液：细胞可能会污染，所以我们会及时安排帮老师解决。
2）细胞漂浮：培养瓶不开封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。次日观察，如细胞大部分又贴回瓶底，表明细胞活力正常，剩余漂浮的细胞可以去掉，留10ml培养液培养观察，细胞生长至汇合度80%，进行消化传代；如细胞还是不贴壁，将细胞离心收集转到新培养瓶，原培养瓶加部分培养液继续培养，中间注意观察，我们的技术人员会一直跟踪指导，直到问题解决。
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